李博安教授團隊開(kāi)發基于熔解曲線分(fēn)析的在一(yī)管中(zhōng)免提快檢CYP2C19*2/3/17多态性的檢測方法

  單核苷酸多态性（SNP）涉及一(yī)個堿基的差異，具有重要的臨床意義。同一(yī)種疾病的患者服用相同的藥物(wù)時，可能會出現不同的反應，藥物(wù)分(fēn)爲顯效、有效、無效。一(yī)個SNP就可能改變蛋白(bái)的表達，從而改變藥物(wù)的靶位點，使其親和力降低或缺乏。因此，SNP分(fēn)析有助于實現正确的診斷和有效治療。

一(yī)些傳統的檢測SNP的方法，如雙脫氧測序、焦磷酸測序、全基因組測序、qPCR等，可以揭示SNP相關重要特征，如識别SNP的類型及其準确位置。但這些方法操作繁瑣，價格昂貴，不适合普遍使用。近期，研究團隊開(kāi)發了一(yī)種基于PCR擴增結合熔解曲線分(fēn)析的檢測策略，可在1管内同時檢測3個SNP位點CYP2C19 * 2 / 3 / 17共9種基因型，并在1 h内實現快速檢測，該研究成果以題爲“An Extraction-Free Method for Rapid Detection of CYP2C19 * 2/3/17 Polymorphisms in One Tube using Melting Curve Analysis”的研究論文在線發表于BIOTECHNOLOGY JOURNAL。

該研究通過不對稱擴增方式對初始模闆進行擴增，使用相鄰探針和Taqman探針相結合的方式進行檢測。CYP2C19 * 2探針的3 '端修飾FAM熒光基團，相鄰間隔1堿基的第二段探針的5 '端修飾BHQ1淬滅基團，3 ' 端修飾磷酸基團P以阻斷延伸。同樣，CYP2C19 * 17的第一(yī)段探針的3' 端修飾熒光團爲ROX，第二段探針的猝滅基團爲BHQ2。在研究過程中(zhōng)發現，一(yī)管中(zhōng)多個相鄰探針的存在會導緻引物(wù)和探針之間的相互幹擾。相鄰探針檢測的方法最終可以在一(yī)管中(zhōng)容納兩個多态性位點。因此，我(wǒ)們将Taqman探針與相鄰探針相結合。CYP2C19 * 3設計爲Taqman探針：5 '端由HEX熒光團修飾，3 '端攜帶BHQ1淬滅基團。由于探針與模闆鏈的結合力随着溫度的升高而降低，因此出現了熔解峰。由于純合野生(shēng)型和突變型樣品之間存在一(yī)個堿基的差異，因此在熔解階段Tm值不同，最終的檢測結果表現出不同的Tm值。

此外(wài)，結合樣本釋放(fàng)劑，可快速提取樣本，數秒即可完成提取，同時該檢測系統不局限于血液樣本，還可以應用于口咽和唾液樣本，增加了采樣的多樣性和便利性。我(wǒ)們同時檢測了93例臨床血液樣本，驗證了我(wǒ)們建立的檢測體(tǐ)系能夠快速、準确地鑒别不同基因型，并且通過Sanger測序驗證了檢測的準确性和有效性。基于實時聚合酶擴增結合熔解曲線分(fēn)析的檢測技術因其準确、快速、操作簡單、成本低等優點，将成爲檢測和指導氯吡格雷使用的有力工(gōng)具。

該論文的第一(yī)作者爲廈門大(dà)學生(shēng)命科學學院博士生(shēng)郭劍光，博士生(shēng)尤偉鑫爲本文的共同第一(yī)作者，廈門大(dà)學生(shēng)命科學學院李博安教授和廈門大(dà)學附屬第一(yī)醫院張睿博士爲該文章的共同通訊作者。本項目得到國家重點研發計劃（2020YFA0112300）、國家自然科學基金（81972458，82103092）、廈門細胞治療研究項目（3502Z20214001）、福建省自然科學基金項目（2022J05312）、福建省健康教育聯合研究項目（2019-WJ-34）和" 111計劃"由國家外(wài)國專家局和教育部主辦（B06016）的資(zī)助。

論文鏈接：https://doi.org/10.1002/biot.202300207